Exploration du rôle potentiel des défensines dans la compétence vectorielle différentielle des poux de corps et de tête pour Bartonella quintana

Parasites & Vecteurs volume 16, Numéro d'article : 183 (2023) Citer cet article

1 Altmétrique

Détails des métriques

Les poux de corps et de tête des humains sont conspécifiques, mais seul le pou de corps fonctionne comme un vecteur pour transmettre des agents pathogènes bactériens tels que Bartonella quintana. Les deux sous-espèces de pou n'ont que deux peptides antimicrobiens, la défensine 1 et la défensine 2. Par conséquent, toute différence dans les propriétés moléculaires et fonctionnelles de ces deux sous-espèces de pou peut être responsable de la compétence vectorielle différentielle entre elles.

Pour élucider la base moléculaire de la compétence vectorielle, nous avons comparé les différences dans les propriétés structurelles et les sites de liaison du facteur de transcription/microARN des deux défensines chez les poux de corps et de tête. Les spectres d'activité antimicrobienne ont également été étudiés à l'aide de défensines de pou recombinantes exprimées via le baculovirus.

Les séquences d'acides aminés pleine longueur de la défensine 1 étaient identiques dans les deux sous-espèces, alors que les deux résidus d'acides aminés de la défensine 2 étaient différents entre les deux sous-espèces. Les défensines de pou recombinantes ont montré des activités antimicrobiennes uniquement contre le Staphylococcus aureus Gram positif représentatif, mais pas contre Escherichia coli Gram négatif ou la levure Candida albicans. Cependant, ils ont montré une activité considérable contre B. quintana, la défensine 2 du pou de corps étant significativement moins puissante que la défensine 2 du pou de tête. sites de liaison aux facteurs, mais augmentation du nombre de sites de liaison aux microARN, suggérant des activités de transcription relativement plus faibles des défensines des poux de corps.

Les activités antibactériennes significativement plus faibles de la défensine 2 ainsi que la probabilité réduite d'expression de la défensine dans les poux de corps contribuent probablement à la réponse immunitaire détendue à la prolifération et à la viabilité de B. quintana, entraînant une compétence vectorielle plus élevée des poux de corps par rapport aux poux de tête.

Le pou de corps humain Pediculus humanus humanus et le pou de tête P. h. capitis sont des ectoparasites hématophages qui passent tout leur cycle de vie sur des hôtes humains et se nourrissent de sang humain. L'infestation par les poux de tête humains cause des problèmes économiques et sociaux, tandis que l'infestation par les poux du corps humain menace la santé publique en veillant à des maladies bactériennes [1]. On pense que le pou de corps a évolué à partir d'un pou de tête conspécifique il y a 40 000 à 70 000 ans, lorsque les humains ont commencé à porter des vêtements [2], et possède une compétence vectorielle plus élevée que le pou de tête. De ces deux types de poux, seul le pou de corps est connu pour transmettre des agents pathogènes bactériens à Gram négatif, notamment Bartonella quintana, Rickettsia prowazekii et Borrelia recurrentis, qui provoquent respectivement la fièvre des tranchées, le typhus épidémique et la fièvre récurrente. Cependant, le pou de tête n'est pas connu pour transmettre des maladies bactériennes à l'homme, probablement en raison de réponses immunitaires plus élevées par rapport à celles du pou de corps [3,4,5].

Une analyse à l'échelle du génome des gènes représentatifs liés au système immunitaire chez les poux de corps et de tête a révélé un ensemble partagé de 93 gènes, indiquant un système immunitaire considérablement réduit chez les poux humains par rapport à d'autres insectes [3]. Le nombre de gènes associés au système immunitaire humoral est considérablement réduit chez les poux humains, certains gènes immunitaires étant absents du génome du pou humain [3, 6]. On suggère que ce système immunitaire simplifié chez les poux humains est dû à leur cycle de vie parasitaire au cours duquel ils se nourrissent exclusivement de sang humain, et le sang est considéré comme un régime relativement stérile. Fait intéressant, seuls deux peptides antimicrobiens (AMP), à savoir la défensine 1 et la défensine 2, ont été identifiés dans les génomes des poux de corps et de tête des humains [3]. Une analyse comparative du transcriptome a révélé que les poux de corps et de tête ont pratiquement le même patrimoine génétique [7], ce qui suggère que les différences apparentes de compétence vectorielle entre ces deux types de poux peuvent être dues aux différents profils de transcription des gènes liés au système immunitaire, tels que les défensines. Les niveaux de transcription basale de la défensine 1 et de la défensine 2 se sont avérés significativement plus élevés dans le tissu du tube digestif des poux de tête que dans celui des poux de corps [4]. De plus, l'expression de la défensine 1 pourrait être induite dans les tissus du tube digestif du pou de tête mais pas dans le pou de corps suite à une épreuve orale avec B. quintana [5]. Pris ensemble, ces résultats suggèrent que les réponses immunitaires accrues médiées par l'expression constitutive et inductible des défensines 1 et 2 contribuent à la compétence vectorielle réduite chez le pou de tête.

Malgré l'importance des défensines des poux dans les réponses immunitaires et la compétence vectorielle chez les poux humains, les informations détaillées sur les propriétés structurelles et les fonctions de ces AMP sont rares. Il reste à élucider comment l'expression des défensines est régulée de manière différentielle et s'il existe une différence dans l'activité antimicrobienne des défensines entre le corps et les poux de tête. De plus, l'efficacité des défensines des poux contre les bactéries pathogènes telles que B. quintana reste à déterminer.

Dans cette étude, nous avons caractérisé les propriétés moléculaires et fonctionnelles des défensines du pou. Les sites de liaison potentiels des facteurs de transcription et les sites de liaison des microARN (miARN) pour les défensines des poux ont été comparés entre les poux de corps et les poux de tête afin d'élucider leurs profils d'expression différentiels inter-sous-espèces. En utilisant la défensine 1 et la défensine 2 recombinantes exprimées in vitro, les spectres d'activité antimicrobienne des défensines des poux ont été déterminés et comparés entre les poux de corps et les poux de tête. Les données présentées dans cette étude devraient faciliter une compréhension approfondie de la compétence vectorielle différentielle médiée par les défensines 1 et 2 entre les poux de corps et de tête.

La souche de pou de corps de San Francisco et la souche de pou de tête de la Floride du Sud ont été élevées dans un système d'alimentation membranaire in vitro [8] dans des conditions contrôlées de 30 °C, 70 à 80 % d'humidité relative et 16/8 h de lumière/obscurité. dans des chambres d'élevage (Institutional Review Board No. E2211/001–003).

Les séquences d'ADN complémentaire de la défensine (ADNc) des poux de corps et de tête ont été obtenues auprès du National Center for Biotechnology Information (NCBI; https://www.ncbi.nlm.nih.gov/) et d'une publication précédente [6], et confirmées par le clonage et le reséquençage de l'ADNc de la souche San Francisco du pou de corps et de la souche sud de la Floride du pou de tête. Les séquences d'acides aminés des défensines de 38 espèces d'insectes ont été alignées à l'aide du package d'analyse CLC Main Workbench 8 (CLC Bio, Waltham, MA, USA). Un arbre phylogénétique a été construit à l'aide de MEGA X (Pennsylvania State University, University Park, PA, USA) en utilisant la méthode du maximum de vraisemblance basée sur le modèle Jones-Taylor-Thornton (JTT) avec 1000 réplications bootstrap. Le nombre sur chaque nœud de l'arborescence indique le pourcentage de valeurs d'amorçage basées sur 1000 pseudo-répliques. La modélisation structurelle tridimensionnelle (3D) des défensines a été réalisée sur la base des structures des peptides défensine A d'insecte [9] et défensine d'anophèle [10] dans la banque de données sur les protéines. Les séquences des gènes du pou ont été soumises au serveur de modélisation moléculaire du SWISS-MODEL (Automated Comparative Protein Modeling Server) [11] pour la prédiction de la structure, et les structures 3D ont été analysées à l'aide du programme UCSF Chimera [12]. Le site de clivage du peptide signal, l'hydrophobicité, le poids moléculaire, le point isoélectrique (pI) et la charge nette à pH 7 ont été prédits à l'aide du serveur SignalP 6.0 (https://services.healthtech.dtu.dk/service.php?SignalP) [ 13], outil ProtScale (https://web.expasy.org/protscale/) [14], outil Compute pI/MW (https://web.expasy.org/compute_pi/) [14] et calculateur de propriété peptidique ( https://pepcalc.com/), respectivement. Les sites de liaison au facteur de transcription dans la région 5' en amont des gènes ont été prédits à l'aide du programme de découverte de motifs PROMO (http://alggen.lsi.upc.es/). La région régulatrice putative de 1000 pb du gène cible (séquences d'ADN génomique de 800 pb en amont plus 200 pb en aval du site de départ de la transcription) a été utilisée pour la prédiction du site de liaison au facteur de transcription. Les séquences ont été obtenues à partir de la base de vecteurs (http://www.vectorbase.org) et des données de séquençage du génome des poux de tête [6] pour les poux de corps et de tête, respectivement. Les régions 3' non traduites (UTR) des transcrits des défensines 1 et 2 du corps et des poux de tête ont été utilisées pour la prédiction des miARN à l'aide de la base de données de séquences de miARN miRBase (http://mirbase.org) [15]. Le seuil de valeur E était de 10 et la base de données de séquences de miARN d'arthropodes a été utilisée pour des prédictions spécifiques.

L'ARN total de cinq poux de corps et de tête a été extrait à l'aide de 200 μl de réactif TRI (Molecular Research Center, Cincinnati, OH, USA), conformément aux instructions du fabricant. Pour éliminer la contamination par l'ADN de l'ARN total, la DNase I (Takara Bio, Kyoto, Japon) a été traitée et l'ADNc a été synthétisé à l'aide de la transcriptase inverse SuperScript IV (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) avec des amorces oligo dT. Les régions du peptide signal et du peptide mature des défensines 1 et 2 du pou de corps et de la défensine 2 du pou de tête ont été amplifiées séparément à l'aide d'amorces spécifiques au gène (fichier supplémentaire 1 : tableau S1) avec Advantage Taq (Clontech, Palo Alto, CA, ETATS-UNIS). Ceux-ci ont ensuite été insérés ensemble dans le vecteur pBacPAK8 (Clontech) avec des amorces complémentaires simple brin contenant un His-Tag 6x. Les séquences plasmidiques pour chaque étape de clonage ont été vérifiées par séquençage d'ADN (Macrogen, Séoul, Corée). Des vecteurs de transfert contenant des défensines ont été co-transfectés avec l'ADN BacPAK6 (Clontech) dans des cellules Sf9 (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific) cultivées en milieu TC-100 (WelGENE, Gyeongsan, Corée) additionné de 10% de sérum bovin fœtal (WelGENE) à 27° C (Fichier complémentaire 2 : Tableau S2). Après 5 jours de transfection avec le réactif Bacfectin (Clontech), le surnageant a été collecté à partir des cellules infectées et utilisé comme stock de virus. Le premier stock de virus a été ensemencé sur 5 × 106 cellules Sf9 et le surnageant a été collecté après 3 jours d'infection par centrifugation à 3300 tr/min pendant 15 min à 4 °C. Le surnageant a été concentré à l'aide d'une unité de filtre centrifuge Amicon Ultra-4 de 3 kDa (MilliporeSigma, Burlington, MA, États-Unis) par centrifugation à 7500 × g pendant 40 min à 4 ° C. Le surnageant concentré a été chargé dans une colonne d'affinité HisTrap HP de 5 ml (GE Healthcare, Pittsburgh, PA, USA) et équilibré avec un tampon de liaison (50 mM NaH2PO4 et 300 mM NaCl contenant 5 mM d'imidazole, pH 8,0) à un débit de 5 ml/min en utilisant AKTAprime plus FPLC (GE Healthcare). La colonne d'affinité HisTrap HP de 5 ml a été lavée avec 40 ml de tampon de lavage (50 mM NaH2PO4 et 300 mM NaCl contenant 10 mM d'imidazole, pH 8,0) et éluée avec un tampon d'élution (50 mM NaH2PO4 et 300 mM NaCl contenant 250 mM d'imidazole, pH 8,0). Les fractions avec des pics d'élution ont été recueillies et concentrées à l'aide d'une unité de filtre centrifuge Amicon Ultra-4-3 kDa (MilliporeSigma) par centrifugation à 7 500 × g pendant 40 min à 4 °C, et le tampon a été échangé avec du Tris–HCl 100 mM (20 mM NaCl, pH 7,8) tampon pour réduire la concentration en imidazole. La concentration de l'échantillon de peptide purifié a été quantifiée à l'aide du kit d'analyse de protéines Pierce BCA (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific), avec de l'albumine de sérum bovin comme protéine standard.

Des Escherichia coli à Gram négatif (American Type Culture Collection [ATCC] n° 11775), des Staphylococcus aureus à Gram positif (ATCC n° 12600) et des levures à Gram positif Candida albicans (ATCC n° 10231) ont été cultivés dans un bouillon Luria–Bertani, bouillon d'infusion cœur-cervelle et bouillon de dextrose de pomme de terre, respectivement, à 200 tr/min dans un incubateur à agitation à 37 ° C pendant la nuit, après quoi les bactéries cultivées ont été diluées par 100 fois dans le même bouillon de culture. Après que la densité optique ait atteint 0,5 à 600 nm (OD600), des aliquotes de 10 μl de chacune des défensines recombinantes 1 et 2 à différentes concentrations ont chacune été incubées avec 90 μl de culture bactérienne dans une plaque à 96 puits dans un incubateur à agitation à 37 ° C à 200 tr/min pendant la nuit. Le tampon Tris-HCl a été utilisé comme contrôle négatif. Les valeurs de DO600 ont été mesurées à l'aide d'un lecteur de microplaques VersaMax (Molecular Devices, San Jose, CA, USA). La concentration inhibitrice semi-maximale (CI50) a été calculée à l'aide de GraphPad Prism 6 (GraphPad Software, San Diego, Californie, États-Unis) et des tests d'activité antimicrobienne ont été effectués avec trois répétitions.

La souche de type sauvage B. quintana JK31, obtenue à l'origine auprès du Dr Jane Koehler (Université de Californie, San Francisco, Californie, États-Unis), a été maintenue dans une installation de niveau de biosécurité 2 à l'Université nationale de Séoul (LML08-1090). Des stocks congelés de B. quintana ont été cultivés sur une plaque de gélose au chocolat dans un pot d'extinction à bougie à 37 ° C pendant 10 jours et passés dans une plaque de gélose fraîche pendant 7 jours supplémentaires de culture. Les cellules de B. quintana cultivées ont été récoltées et rincées avec 1 ml de solution saline tamponnée au phosphate (PBS) par centrifugation à 1000 × g pendant 4 min. Après deux rinçages supplémentaires, les culots ont été remis en suspension dans 100 µl de PBS. Des aliquotes de 5 µl de la suspension bactérienne de 100 µl ont été diluées en série avec du PBS ; puis 12 μl de chaque suspension bactérienne diluée 1000 fois ont été soigneusement mélangés avec 12 μl de 100 μM de gentamicine comme contrôle positif, 100 mM de tampon Tris – HCl comme contrôle négatif et 100 μM de défensines recombinantes 1 et 2 du pou du corps ou de la défensine 2 du pou de tête. Un total de 8 μl du mélange a été déposé trois fois sur une plaque de gélose au chocolat, et le nombre d'unités formant colonies (UFC) a été calculé après incubation dans un pot d'extinction à bougie à 37 ° C pendant 10 jours. L'indice de colonie a été obtenu en divisant les UFC/μl par les UFC/μl du contrôle négatif.

Les activités hémolytiques des défensines recombinantes 1 et 2 du pou de corps et de la défensine 2 du pou de tête ont été évaluées en utilisant des globules rouges humains (RBC) comme décrit précédemment [16]. Les globules rouges ont été lavés 3 fois avec du PBS pendant 15 min à 960 tr/min puis remis en suspension dans du PBS à une concentration de 2 %. Des aliquotes de 10 μl de défensines recombinantes à quatre concentrations (10, 20, 50 et 100 μM) et d'antibiotiques à cinq concentrations (10, 20, 50, 100 et 200 μM) ont été incubées chacune avec 90 μl de globules rouges pendant 30 min à 37 °C et centrifugé 15 min à 960 rpm. La DO540 du surnageant a été mesurée à l'aide d'un lecteur de microplaques VersaMax (Molecular Devices), et les activités hémolytiques relatives du tampon Tris – HCl et du Triton X-100 à 0, 1% ont été considérées comme étant de 0% et 100%, respectivement. Les tests hémolytiques ont été effectués avec trois répétitions et le protocole a été approuvé par l'Institutional Review Board (Institutional Review Board No. E2211/001–003).

À chaque instant, toutes les données expérimentales ont été recueillies en trois exemplaires. Une analyse unidirectionnelle de la variance avec le test de comparaison multiple de Tukey et des tests t non appariés ont été utilisés pour déterminer les différences significatives en interprétant les valeurs P. La signification statistique a été fixée à P < 0,05 et l'analyse statistique a été effectuée à l'aide du logiciel GraphPad Prism 6.01 (GraphPad Software).

Les défensines 1 et 2 des poux de corps et de tête ont été alignées à l'aide du CLC Main Workbench 8 (Qiagen, Hilden, Allemagne) (Fig. 1). Les séquences de cadre de lecture ouvert (ORF) de la défensine 1 du pou de corps (BLDef1) et de la défensine 1 du pou de tête (HLDef1) correspondaient complètement à la séquence de référence BLDef1 (numéro d'accession : XP_002428138.1). BLDef1 et HLDef1 étaient identiques et consistaient en 109 acides aminés, dont un peptide signal de 20 acides aminés, un propeptide de 46 acides aminés et une région peptidique mature de 43 acides aminés. La séquence ORF de la défensine 2 du pou de corps (BLDef2) était complètement identique à la séquence de référence (numéro d'accès : XP_002432619.1) mais était légèrement différente de la séquence de la défensine 2 du pou de tête (HLDef2). Par rapport à la séquence HLDef2 de 116 acides aminés, BLDef2 était composée de 113 acides aminés en raison de la suppression d'un résidu cystéine dans la région du peptide signal et de deux résidus (lysine et acide glutamique) dans la région du propeptide ; de plus, deux substitutions d'acides aminés ont été trouvées entre BLDef2 et HLDef2 : une dans la région du propeptide (glutamine en position d'acide aminé 29 pour BLDef2 contre arginine en position d'acide aminé 30 pour HLDef2) et l'autre dans la région du peptide mature (tyrosine en position position d'acide aminé 105 pour BLDef2 et acide aspartique à la position d'acide aminé 108 pour HLDef2). Le remplacement radical des acides aminés de l'acide aspartique par la tyrosine dans le peptide mature de BLDef2 impliquait la possibilité d'activités biologiques différentes entre BLDef2 et HLDef2.

Alignements des séquences d'acides aminés de la défensine 1 et de la défensine 2 des poux de corps et de tête avec d'autres insectes hématophages, y compris la puce du chat et les espèces d'hémiptères. La flèche indique le point de départ des régions peptidiques matures, les astérisques indiquent le site de clivage dipeptidique pour les protéases de type trypsine, les triangles ouverts indiquent différents acides aminés entre BLDef2 et HLDef2, les triangles pleins indiquent les six résidus de cystéine conservés. Les séquences de BLDef1 (XP_002428138.1) et BLDef2 (XP_002432619.1) ont été obtenues à partir de la base de données du National Center for Biotechnology Information (NCBI). BL, pou de corps ; Def1, défensine 1; Def2, défensine 2; Cf, Ctenocephalides felis ; Cl, Cimex lectularius ; HL, pou de tête ; Rp, Rhodnius prolixus

Des sites de clivage dipeptidique conservés (-RR- et -KR- dans les défensines du pou humain et d'autres insectes, respectivement) pour les protéases de type trypsine ont été trouvés entre les régions du propeptide et du peptide mature [17], et six résidus de cystéine conservés étaient présents dans les régions peptidiques matures de toutes les défensines examinées (Fig. 1). Le point de départ des régions peptidiques matures dans toutes les défensines contenait des résidus d'alanine et de thréonine (-AT-), à l'exception des défensines 1 et 2 de la puce du chat (-VT-). La région C-terminale de toutes les défensines examinées a montré une conservation élevée de deux résidus basiques, soit l'arginine-arginine (RR) ou l'arginine-lysine (RK). Les similitudes de séquence des peptides matures dans les défensines 1 et 2 à travers les espèces d'insectes examinées étaient relativement plus élevées (51,2–72,1% et 60,5–66,7%, respectivement) par rapport aux séquences complètes (33,3–46% et 31,9–35,9%, respectivement).

Les défensines 1 et 2 de 33 espèces d'insectes (2 Phthiraptera, 6 Diptera, 14 Hymenoptera, 5 Hemiptera, 3 Coleoptera, 1 Siphonaptera, 1 Thysanoptera, 1 Orthoptera) ont été alignées avec celles des poux de corps, et les défensines 1 et 2 de 46 espèces d'insectes (2 Phthiraptères, 5 Diptères, 30 Hyménoptères, 4 Hémiptères, 2 Coléoptères, 2 Lépidoptères, 1 Siphonaptères) ont été alignés avec ceux des poux de tête (Fichier complémentaire 3 : Figure S1). Les régions peptidiques matures des défensines des espèces d'insectes ont montré des similitudes de séquence plus élevées que celles des séquences 5'. En particulier, six résidus de cystéine ont été conservés dans la plupart des régions peptidiques matures, démontrant que les six résidus de cystéine sont l'un des motifs structuraux représentatifs dans la plupart des défensines d'insectes. Dans l'arbre phylogénétique, les défensines 1 et 2 des poux de corps et de tête se sont regroupées avec les défensines 1 et 2 de la puce du chat, Ctenocephalides felis (Siphonaptera), malgré la distance taxonomique entre les poux et les puces (Fig. 2).

Arbre phylogénétique des défensines d'espèces d'insectes. La case en pointillé rouge indique le clade des défensines du pou. L'analyse phylogénétique a été réalisée en utilisant la méthode du maximum de vraisemblance basée sur le modèle Jones-Taylor-Thornton (JTT) avec 1000 réplications bootstrap. Les pourcentages des valeurs bootstrap sont représentés sur chaque nœud de l'arbre. D, diptères ; moi, Ixodida; S, siphonaptères ; P, Phthiraptères ; H, hémiptère

BLDef1 et HLDef1 possédaient le moins d'acides aminés chargés positivement (14), montrant ainsi une valeur de pI relativement inférieure (6,84) et une charge nette à pH 7 (- 0,2). L'hydrophobicité (40,37 %) de BLDef1 et HLDef1 était supérieure à celle de BLDef2 et HLDef2 (35,34 %) (tableau 1). Les propriétés structurelles globales de BLDef2 et HLDef2, telles que la valeur de pI, la charge nette et l'hydrophobicité, étaient identiques à l'exception du nombre d'acides aminés chargés positivement (18 et 19, respectivement). BLDef1 et HLDef1 présentaient également le plus faible nombre d'acides aminés chargés positivement (10) parmi les défensines éliminées par les propeptides, mais présentaient le pI (9,61) et la charge nette (6,8) les plus élevés. BLDef2 et HLDef2 sans propeptide possédaient des nombres identiques d'acides aminés chargés positivement (11) et un pourcentage identique d'hydrophobicité (38,24%), alors que le pI (8,46 et 8,29, respectivement) et la charge nette (6,5 et 5,5, respectivement) étaient différents et inférieures à celles de BLDef1 et HLDef1 sans propeptide. Les défensines natives et les défensines éliminées par les propeptides du corps et des poux de tête présentaient des poids moléculaires similaires (12, 1 à 12, 9 et 6, 9 à 7, 4 kDa, respectivement).

Une analyse structurelle 3D a révélé que BLDef1 et HLDef1 consistaient tous deux en une seule hélice α identique (His83–Lys93), tandis que BLDef2 et HLDef2 comprenaient une hélice α (Asn87-Ile96) et deux feuillets β (β1 : Gly104-Cys107 β2 : Cys112-Arg115) (figure 3). Le peptide mature de la défensine 2 contenait un acide aminé différent dans la boucle entre les deux feuillets β antiparallèles, ce qui a provoqué une légère distorsion de la boucle, comme indiqué lors de l'examen de l'image fusionnée (Fig. 3); cependant, les structures globales de BLDef2 et HLDef2 étaient presque identiques.

Structures protéiques tridimensionnelles de la défensine 1 du pou (panneau de gauche) et de la défensine 2 (panneau de droite) du corps (en haut) et des poux de tête (au milieu). L'image du bas est l'image fusionnée. Les chaînes latérales de différents acides aminés entre la défensine 2 du pou de corps et la défensine 2 du pou de tête sont présentées. N-ter, N-terminal; C-ter, C-terminal

Six sites putatifs de liaison au facteur de transcription, y compris les sites de type bossu (Hb), de type déformé (Dfd), de type sauté (Eve), de type sans queue (Tll), de type apparié (Prd) et mères contre dpp (Mad )-like sites, ont été couramment identifiés dans les régions régulatrices putatives (800 pb en amont et 200 pb en aval du site de début de transcription) de BLDef1 et HLDef1, avec un site de liaison supplémentaire de type Hb étant présent à 796–802 pb en amont de HLDef1 (Fig. 4). Dans le cas de la défensine 2, cinq facteurs de transcription, y compris les sites de type Hb, Dfd, Eve, Mad et e2 factor (E2F), ont été couramment trouvés dans BLDef2 et HLDef1, avec un facteur supplémentaire Le site de type Hb est présent à 88–94 pb en amont de HLDef2 (Fig. 4).

Motifs potentiels de liaison au facteur de transcription observés dans la région régulatrice putative (800 pb en amont et 200 pb en aval du site de début de la transcription du gène). Les barres de couleurs et de motifs différents représentent différents motifs potentiels. Les différents motifs entre le corps et le pou de tête sont signalés par un astérisque. BLDef, Défensine du pou du corps ; HLDef, défensine du pou de tête ; Dfd, déformé ; Eve, a même sauté; Hb, bossu ; Mad, mères contre dpp; Prd, jumelé ; T11, sans queue

Six sites de liaison aux miARN putatifs ont été prédits dans le 3'UTR du transcrit BLDef1, tandis que trois sites de liaison aux miARN putatifs ont été prédits dans le transcrit HLDef1 (tableau 2). Dans le 3'UTR des transcrits de la défensine 2, cinq sites de liaison miARN putatifs ont été prédits dans BLDef2, tandis que quatre sites de liaison miARN putatifs ont été prédits dans HLDef2 (tableau 2).

Les témoins positifs, comprenant l'ampicilline, la kanamycine et la gentamicine, ont inhibé la croissance d'E. coli et de S. aureus ; cependant, la croissance de C. albicans n'a pas été inhibée, même aux concentrations les plus élevées de ces antibiotiques (200 μM) et de BLDef1 et BLDef2 recombinants (100 μM) (Tableau 3). L'ampicilline a inhibé S. aureus, avec des valeurs de concentration inhibitrice demi-maximale (CI50) 44,5 fois inférieures (P = 0,0007) à celles contre E. coli, tandis que la kanamycine a inhibé E. coli, avec des valeurs de CI50 8,5 fois inférieures (P = 0,002 ) que ceux contre S. aureus, indiquant que ces deux antibiotiques possèdent des activités antimicrobiennes très spécifiques qui dépendent des espèces bactériennes. La gentamicine a présenté des valeurs IC50 plus faibles contre E. coli et S. aureus que les deux autres antibiotiques et les défensines recombinantes du corps et les poux de tête. BL/HLdef1 et BLDef2 recombinants purifiés n'ont inhibé que la croissance de S. aureus, avec des valeurs IC50 similaires (33,2 ± 1,4 μM et 34,4 ± 0,8 μM, respectivement ; P = 0,2669), qui étaient environ 20 et 48 fois moins puissantes que l'ampicilline (P < 0,0001) et la gentamicine (P < 0,0001), respectivement, mais 1,8 fois plus puissante que la kanamycine (P = 0,0093 et 0,0114, respectivement). HLDef2 a montré des valeurs IC50 6,1, 6,4 et 11,4 fois plus faibles contre S. aureus que BL/HLDef1 (P = 0,004), BLDef2 (P = 0,0031) et la kanamycine (P < 0,0001), respectivement. Ces résultats indiquent que les défensines des poux possèdent une activité antimicrobienne spécifique aux bactéries Gram positives plus efficace que la kanamycine, et que HLDef2 possède une activité antimicrobienne significativement plus élevée contre S. aureus Gram positif que BLDef2.

Le traitement avec 50 μM de gentamicine comme contrôle positif a entraîné une inhibition de 98, 4% de la croissance des colonies de B. quintana par rapport au contrôle négatif traité au tampon Tris – HCl (Fig. 5). HLDef2 recombinant présentait une activité antibactérienne significativement plus élevée contre B. quintana (97,2 %) (P < 0,0001) que BLDef2 (31,5 %) (P = 0,0023). Le recombinant BL/HLDef1 ne présentait aucune activité antibactérienne apparente contre B. quintana.

a Image représentative de la gentamicine (P, contrôle positif), du tampon Tris – HCl (N, contrôle négatif) et du mélange Bartonella quintana traité par BL / HLDef1, BLDef2 ou HLDef2 déposé sur une plaque de gélose au chocolat. La gentamicine et le tampon Tris-HCl ont été utilisés comme contrôle positif et négatif, respectivement. b Résultat du test d'inhibition du mélange B. quintana avec les défensines de pou recombinantes. L'indice de colonie a été obtenu à partir des unités formant colonies / microlitre (UFC / μl) divisées par les UFC / μl de contrôle négatif en supposant que B. quintana n'est pas inhibé par le tampon Tris – HCl. Les résultats ont été analysés statistiquement à l'aide d'une analyse de variance unidirectionnelle. Les astérisques indiquent des différences significatives à **P < 0,01 et ***P < 0,0001 ; ns, pas de différence significative. BL/HLDef1, Pou de corps/pou de tête défensine 1 ; BLDef2, pou de corps défensine 2 ; HLDef2, défensine de pou de tête 2

Les défensines des insectes sont généralement actives contre un large spectre d'agents pathogènes [18]. Bien que BL/HLDef1 recombinant n'ait été actif que contre S. aureus à Gram positif, BL/HLDef2 recombinant a montré une activité antibactérienne significativement élevée contre S. aureus à Gram positif et B. quintana à Gram négatif. Des cas similaires, dans lesquels la défensine a montré une activité contre les bactéries Gram-négatives, ont déjà été rapportés chez une variété d'arthropodes [19, 20, 21, 22, 23, 24]. Cependant, les défensines des poux n'ont montré aucune activité hémolytique apparente malgré leurs activités antibactériennes substantiellement élevées, une observation également rapportée pour d'autres défensines [17, 25].

Les défensines d'insectes ont généralement une boucle N-terminale et une hélice α suivie d'une structure de feuillet β antiparallèle reliée par des liaisons disulfure [26]. BL/HLDef2 a montré ces structures uniques ; cependant, BL / HLDef1 semblait n'avoir qu'un fragment α-hélicoïdal et trois paires de cystéine spécifiques à la défensine sans feuille β. De plus, les défensines des poux ont montré des valeurs de pI élevées, similaires à d'autres défensines d'insectes qui exercent une activité antibactérienne par l'interaction entre les peptides chargés positivement et les composants membranaires bactériens chargés négativement (c'est-à-dire le polysaccharide et le lipopolysaccharide chez les bactéries Gram-positives et Gram-négatives, respectivement) [ 27].

Parmi les trois domaines des défensines (peptide signal, propeptide et peptides matures fonctionnels), le propeptide est généralement considéré comme inhibant l'activité antimicrobienne du domaine C-terminal des α-défensines neutrophiles humaines (HNP) par ses charges nettes opposées [28] . L'activation des HNP cationiques nécessite l'excision protéolytique du propeptide anionique [29], ce qui indique que les forces électrostatiques pourraient être essentielles pour les interactions intermoléculaires inhibitrices entre le peptide mature cationique et le propeptide anionique de la défensine [29]. Les propeptides et les peptides matures de BL/HLDef1 et BL/HLDef2 présentaient également des charges nettes opposées : la charge nette du peptide mature cationique de BL/HLDef1 était de 7,8, et celles de BLDef2 et HLDef2 étaient de 7,8 et 6,8, respectivement. En revanche, les charges nettes du propeptide anionique de BL/HLDef1 étaient de -8, et celles de BL/HLDef2 étaient de -2 et -1, respectivement. Étant donné que ces résultats indiquent une interaction électrostatique inhibitrice potentielle entre le propeptide et le peptide mature des défensines du pou, nous avons exprimé uniquement les domaines peptidiques matures des défensines du pou sans propeptides et étudié leurs propriétés biologiques.

Le HLDef2 recombinant a montré une activité antibactérienne significativement plus élevée contre le B. quintana à Gram négatif et le S. aureus à Gram positif que le BL/HLDef1 ou le BLDef2 recombinant. Étant donné qu'un seul résidu d'acide aminé (tyrosine pour BLDef2 vs acide aspartique pour HLDef2) dans la région peptidique mature de la défensine 2 diffère entre les poux de corps et de tête, cette différence d'acides aminés est probablement responsable de l'activité antibactérienne différentielle contre B. quintana et S .aureus. Le seul facteur significativement différent causé par la substitution d'acides aminés dans les propriétés structurelles entre BLDef2 et HLDef2 était la charge nette à pH 7. L'augmentation de la charge nette (+ 6,5 pour BLDef2 vs + 5,5 pour HLDef2) résultait de la substitution de l'acide aspartique par la tyrosine dans BLDef2 et peut contribuer à la réduction de l'activité antibactérienne contre B. quintana à Gram négatif et S. aureus à Gram positif, comme on l'observe généralement dans les défensines d'insectes, où une charge nette plus faible est associée à des activités antimicrobiennes élevées contre les bactéries à Gram négatif [ 30]. De plus, comme démontré par l'ingénierie de la défensine Nasonia vitripennis comme modèle [31], le sous-domaine de la feuille β des défensines d'insectes est un facteur important pour une large activité antibactérienne contre les bactéries Gram-positives et Gram-négatives. Par conséquent, l'altération structurelle du sous-domaine du feuillet β causée par la substitution par un résidu tyrosine au niveau du virage β est susceptible d'affecter l'activité antibactérienne de BLDef2. Pris ensemble, l'augmentation de la charge nette et le changement structurel dans le sous-domaine de la feuille β de BLDef2 semblent être les principaux déterminants de l'activité antibactérienne réduite, en particulier contre B. quintana chez les poux de corps, qui à son tour a probablement augmenté la compétence vectorielle.

La seule différence dans les sites de liaison des facteurs de transcription des défensines 1 et 2 entre les poux de corps et les poux de tête était la présence d'un site de liaison supplémentaire aux protéines de type Hb dans les régions régulatrices de HLDef1 et HLDef2. Hunchback appartient à la famille des protéines à doigt de zinc C2H2 qui fonctionne comme une protéine régulatrice des gènes [32]. Il n'est pas clair si les protéines de type Hb activent ou répriment la transcription des gènes de la défensine dans le corps et les poux de tête. Néanmoins, en supposant le rôle d'activation de la transcription de la protéine de type Hb chez les poux, la présence d'un site de liaison supplémentaire pour la protéine de type Hb dans HLDef1 ou HLDef2 peut entraîner un niveau de transcription basale plus élevé chez les poux de tête [4] et chez les poux. expression inductible de la défensine 1 dans les tissus du tube digestif des poux de tête après épreuve orale avec B. quintana [5]. Les miARN sont une classe d'ARN courts, endogènes et non codants d'une longueur de 21 à 24 nucléotides qui régulent l'expression des gènes via un appariement de bases avec des ARNm [33]. La "séquence graine" du miARN avec deux à huit nucléotides à l'extrémité 5 'se lie au site d'appariement complémentaire dans le 3'UTR des ARNm, entraînant l'inhibition de la traduction et de l'expression du gène cible ou la dégradation de l'ARNm [34]. Un nombre accru de sites de liaison miARN putatifs (6) a été prédit dans le 3'UTR du transcrit BLDef1 par rapport au transcrit HLDef1 (3). De même, un nombre accru de sites de liaison miARN putatifs (5) a été prédit dans le 3'UTR de BLDef2 par rapport au transcrit HLDef2 (4). Ces résultats suggèrent que l'expression de BLDef1 et BLDef2 est plus susceptible d'être régulée à la baisse que celle de HLDef1 et HLDef2 chez le pou de tête. Par conséquent, l'expression relativement réduite de BLDef1 et BLDef2 dans les poux de corps semble contribuer à l'amélioration de la compétence vectorielle [5].

Comprendre le système immunitaire d'un vecteur de transmission de maladie humaine est d'une grande importance car c'est le système immunitaire qui détermine en grande partie la compétence du vecteur. Cependant, la cascade de défense immunitaire contre les agents pathogènes bactériens, tels que B. quintana, R. prowazekii et B. recurrentis, chez les poux de corps reste encore largement inconnue. Néanmoins, nous avons élucidé (i) que les poux de corps ont une défensine 2 fonctionnellement altérée, qui est significativement moins efficace contre B. quintana, un agent pathogène modèle utilisé dans cette étude, et (ii) que l'expression de la défensine 1 et de la défensine 2 est probablement régulé à la baisse en raison de la différence dans les séquences régulatrices pour la liaison au facteur de transcription et la liaison au miARN. Par conséquent, la compétence vectorielle relativement plus élevée des poux de corps semble être principalement due à l'activité antibactérienne réduite de la défensine 2 contre les bactéries pathogènes et aux quantités plus faibles de BLDef1 et BLDef2.

La défensine 1 et la défensine 2, les seuls peptides antimicrobiens du corps humain et des poux de tête, présentent des différences de structure et d'activité antimicrobienne. Les activités antibactériennes significativement plus faibles de la défensine 2 ainsi que la probabilité réduite d'expression de la défensine et d'activités de transcription chez les poux de corps contribuent probablement à la réponse immunitaire détendue à la prolifération et à la viabilité de B. quintana, entraînant une compétence vectorielle plus élevée des poux de corps par rapport aux poux de tête. Ces données faciliteront une compréhension approfondie de la compétence vectorielle différentielle médiée par les défensines 1 et 2 entre les poux de corps et de tête.

N'est pas applicable.

Peptide antimicrobien

Pou de corps défensine

Unité formant colonie

Déformé

Facteur E2

Même sauté

Bossu

Défensine du pou de tête

Concentration inhibitrice demi-maximale

Les mères contre le dpp

MicroARN

Solution saline tamponnée au phosphate

Jumelé

des globules rouges

Sans queue

Durden LA. Poux (Phthiraptères). Dans : Mullen GR, Durden LA, éds. Entomologie médicale et vétérinaire, 3e éd. Cambridge : presse académique ; 2019. p. 79–106.

Kirkness EF, Haas BJ, Sun WL, Braig HR, Perotti MA, Clark JM, et al. Les séquences du génome du pou du corps humain et de son endosymbionte primaire donnent un aperçu du mode de vie parasitaire permanent. Proc Natl Acad Sci USA. 2010;107:12168–73.

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Kim JH, Min JS, Kang JS, Kwon DH, Yoon KS, Strycharz J, et al. Comparaison des réponses immunitaires humorales et cellulaires entre les poux de corps et les poux de tête suite à une provocation bactérienne. Insect Biochem Molec. 2011;41:332–9.

Article CAS Google Scholar

Kim JH, Yoon KS, Previte DJ, Pittendrigh BR, Clark JM, Lee SH. Comparaison de la réponse immunitaire dans les tissus du tube digestif du corps par rapport aux poux de tête suite à une infection orale par Escherichia coli. J Asia-Pac Entomol. 2012;15:409–12.

Article CAS Google Scholar

Kim JH, Previte DJ, Yoon KS, Murenzi E, Koehler JE, Pittendrigh BR, et al. Comparaison de la prolifération et de l'excrétion de Bartonella quintana entre les poux de corps et les poux de tête après provocation orale. Insecte Mol Biol. 2017;26:266–76.

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Kang JS, Cho YJ, Kim JH, Kim SH, Yoo S, Noh SJ, et al. Comparaison des profils génomiques entre les poux de tête et de corps. J Asia-Pac Entomol. 2015;18:377–82.

Article CAS Google Scholar

Olds BP, Coates BS, Steele LD, Sun W, Agunbiade TA, Yoon KS, et al. Comparaison des profils transcriptionnels des poux de tête et de corps. Insecte Mol Biol. 2012;21:257–68.

Article CAS PubMed Google Scholar

Yoon KS, Strycharz JP, Gao JR, Takano-Lee M, Edman JD, Clark JM. Un système d'élevage in vitro amélioré pour le pou de tête humain permet la détermination de la résistance aux pédiculicides formulés. Pestic Biochem Phys. 2006;86:195–202.

Article CAS Google Scholar

Cornet B, Bonmatin JM, Hetru C, Hoffmann JA, Ptak M, Vovelle F. Structure de solution tridimensionnelle raffinée de la défensine d'insecte A. Structure. 1995;3:435–48.

Article CAS PubMed Google Scholar

Landon C, Barbault F, Legrain M, Guenneugues M, Vovelle F. Conception rationnelle de peptides actifs contre la bactérie Gram positive Staphylococcus aureus. Protéines. 2008;72:229–39.

Article CAS PubMed Google Scholar

Arnold K, Bordoli L, Kopp J, Schwede T. L'espace de travail SWISS-MODEL : un environnement Web pour la modélisation de l'homologie de la structure des protéines. Bioinformatique. 2006;22:195–201.

Article CAS PubMed Google Scholar

Pettersen EF, Goddard TD, Huang CC, Couch GS, Greenblatt DM, Meng EC, et al. Chimère UCSF—Un système de visualisation pour la recherche exploratoire et l'analyse. J Comput Chem. 2004;25:1605–12.

Article CAS PubMed Google Scholar

Teufel F, Armenteros JJA, Johansen AR, Gislason MH, Pihl SI, Tsirigos KD, et al. SignalP 6.0 prédit les cinq types de peptides signaux à l'aide de modèles de langage protéique. Nat Biotechnol. 2022;40:1023–5 https://doi.org/10.1038/s41587-021-01156-3

Gasteiger E, Hoogland C, Gattiker A, Wilkins MR, Appel RD, Bairoch A. Outils d'identification et d'analyse des protéines sur le serveur ExPASy. Dans : Walker JM (ed). Le manuel des protocoles de protéomique. Totowa : Humana Press ; 2005. p. 571–607.

Kozomara A, Birgaoanu M, Griffiths-Jones S. miRBase : des séquences de microARN à la fonction. Nucleic Acids Res. 2019;47:D155–62.

Article CAS PubMed Google Scholar

Yoon KA, Kim WJ, Cho H, Yoon H, Ahn NH, Lee BH, et al. Caractérisation des peptides et protéines antimicrobiens des asticots des espèces de mouches Calliphoridae et Sarcophagidae (Diptera). Comp Biochem Phys C Toxicol Pharmacol 2022;259:109390. https://doi.org/10.1016/j.cbpc.2022.109390.

Wei L, Mu LX, Wang YP, Bian H, Li J, Lu YL, et al. Purification et caractérisation d'une nouvelle défensine des glandes salivaires de la mouche noire Simulium bannaense. Vecteur parasite. 2015;8:71. https://doi.org/10.1186/s13071-015-0669-9.

Dimarcq JL, Bulet P, Hetru C, Hoffmann J. Peptides antimicrobiens riches en cystéine chez les invertébrés. Biopolymères. 1998;47:465–77.

3.0.CO;2-#" data-track-action="article reference" href="https://doi.org/10.1002%2F%28SICI%291097-0282%281998%2947%3A6%3C465%3A%3AAID-BIP5%3E3.0.CO%3B2-%23" aria-label="Article reference 18" data-doi="10.1002/(SICI)1097-0282(1998)47:63.0.CO;2-#">Article CAS PubMed Google Scholar

Lai R, Lomas LO, Jonczy J, Turner PC, Rees HH. Deux nouveaux peptides antimicrobiens non cationiques de type défensine provenant de l'hémolymphe de la tique femelle Amblyomma hebraeum. Biochem J. 2004;379:681–5.

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Seufi AM, Hafez EE, Galal FH. Identification, analyse phylogénétique et profil d'expression d'un gène de défensine d'insecte anionique, à activité antibactérienne, de la chrysomèle du cotonnier Spodoptera littoralis. BMC Mol Biol. 2011;12:47. https://doi.org/10.1186/1471-2199-12-47.

Vizioli J, Richman AM, Uttenweiler-Joseph S, Blass C, Bulet P. Le peptide défensine du moustique vecteur du paludisme Anopheles gambiae : activités antimicrobiennes et expression chez les moustiques adultes. Insect Biochem Mol Biol. 2001;31:241–8.

Article CAS PubMed Google Scholar

Rees JA, Moniatte M, Bulet P. Nouveaux peptides antibactériens isolés d'un bourdon européen, Bombus pascuorum (Hymenoptera, Apoidea). Insect Biochem Mol Biol. 1997;27:413–22.

Article CAS PubMed Google Scholar

Ye JL, Zhao HW, Wang HJ, Bian JM, Zheng RQ. Un peptide antimicrobien défensine des venins de Nasonia vitripennis. Toxicon. 2010;56:101–6.

Article CAS PubMed Google Scholar

Zhou J, Liao M, Ueda M, Gong H, Xuan X, Fujisaki K. Caractérisation de la séquence et modèles d'expression de deux peptides antimicrobiens de type défensine de la tique Haemaphysalis longicornis. Peptides. 2007;28:1304–10.

Article CAS PubMed Google Scholar

Cerovsky V, Slaninova J, Fucik V, Monincova L, Bednarova L, Malon P, et al. Lucifensin, un nouvel insecte défensine des asticots médicinaux : synthèse et étude structurale. ChemBioChem. 2011;12:1352–61.

Article CAS PubMed Google Scholar

Ganz T. Defensins : peptides antimicrobiens de l'immunité innée. Nat Rev Immunol. 2003;3:710–20.

Article CAS PubMed Google Scholar

Bulet P, Hetru C, Dimarcq JL, Hoffmann D. Peptides antimicrobiens chez les insectes ; la structure et la fonction. Dev Comp Immunol. 1999;23:329–44.

Article CAS PubMed Google Scholar

Zou GZ, de Leeuw E, Lubkowski J, Lu WY. Déterminants moléculaires de l'interaction de l'alpha défensine neutrophile humaine 1 avec son propeptide. J Mol Biol. 2008;381:1281–91.

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Valore EV, Martin E, Harwig SSL, Ganz T. Inhibition intramoléculaire de la défensine humaine HNP-1 par son propiece. J Clin Invest. 1996;97:1624–9.

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Varkey J, Singh S, Nagaraj R. Activité antibactérienne de peptides linéaires couvrant le domaine de la feuille β carboxy-terminale des défensines d'arthropodes. Peptides. 2006;27:2614–23.

Article CAS PubMed Google Scholar

Gao B, Zhu S. Un peptide en épingle à cheveux β dérivé de la défensine d'insecte avec une activité antibactérienne améliorée. ACS Chem Biol. 2014;9:405–13.

Article CAS PubMed Google Scholar

Pinnell J, Lindeman PS, Colavito S, Lowe C, Savage RM. Les rôles divergents du bossu du gène de segmentation. Intègre Comp Biol. 2006;46:519–32.

Article PubMed Google Scholar

Asgari S. MicroARN fonctionne chez les insectes. Insect Biochem Mol Biol. 2013;43:388–97.

Article CAS PubMed Google Scholar

Lucas K, Raikhel AS. MicroARN d'insectes : biogenèse, profil d'expression et fonctions biologiques. Insect Biochem Mol Biol. 2013;43:24–38.

Article CAS PubMed Google Scholar

Télécharger les références

Nous tenons à remercier le professeur Jane Koehler (Université de Californie, San Francisco) pour la souche B. quintana JK31 et le professeur Jinki Yeom (Seoul National University College of Medicine) pour ses discussions perspicaces.

Ce travail a été financé en partie par l'hôpital universitaire national de Séoul. DEL a été soutenu par le programme Brain Korea 21 Four.

Institut de recherche sur l'agriculture et les sciences de la vie, Université nationale de Séoul, Séoul, 08826, République de Corée

Kyungjae Andrew Yoon et Si Hyeock Lee

Département de biotechnologie agricole, Université nationale de Séoul, Séoul, 08826, République de Corée

Do Eun Lee et Si Hyeock Lee

Département de médecine tropicale et de parasitologie, Collège de médecine de l'Université nationale de Séoul, Séoul, 03080, République de Corée

Yoo Hyeon Kim

Institut des maladies endémiques, Collège de médecine de l'Université nationale de Séoul, Séoul, 03080, République de Corée

Yoo Hyeon Kim

Vous pouvez également rechercher cet auteur dans PubMed Google Scholar

KAY a mené des expériences et rédigé le manuscrit. DEL a mené des expériences. SHL et JHK ont conçu l'étude. JHK a supervisé les travaux de recherche et rédigé le manuscrit. Tous les auteurs ont lu et approuvé le manuscrit final.

Correspondance avec Ju Hyeon Kim.

Le système d'élevage in vitro des poux de corps et de tête utilisant du sang humain et un dosage hémolytique des défensines des poux de corps et de tête ont été examinés et approuvés par le Comité d'examen institutionnel de l'Université nationale de Séoul, IRB n° E2211/001–003.

N'est pas applicable.

Les auteurs ne déclarent aucun intérêt concurrent.

Springer Nature reste neutre en ce qui concerne les revendications juridictionnelles dans les cartes publiées et les affiliations institutionnelles.

Amorces utilisées pour l'expression in vitro des défensines 1 et 2 des poux de corps et de tête.

Activités hémolytiques des défensines recombinantes des poux de corps et de tête et des antibiotiques.

Alignements des séquences d'acides aminés des défensines 1 et 2 du pou de corps et de tête et d'autres espèces d'insectes. Six résidus de cystéine conservés sont marqués par des cases rouges.

Libre accès Cet article est sous licence Creative Commons Attribution 4.0 International, qui autorise l'utilisation, le partage, l'adaptation, la distribution et la reproduction sur tout support ou format, à condition que vous accordiez le crédit approprié à l'auteur ou aux auteurs originaux et à la source, fournissez un lien vers la licence Creative Commons et indiquez si des modifications ont été apportées. Les images ou tout autre matériel de tiers dans cet article sont inclus dans la licence Creative Commons de l'article, sauf indication contraire dans une ligne de crédit au matériel. Si le matériel n'est pas inclus dans la licence Creative Commons de l'article et que votre utilisation prévue n'est pas autorisée par la réglementation légale ou dépasse l'utilisation autorisée, vous devrez obtenir l'autorisation directement du détenteur des droits d'auteur. Pour voir une copie de cette licence, visitez http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/. La renonciation Creative Commons Public Domain Dedication (http://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/) s'applique aux données mises à disposition dans cet article, sauf indication contraire dans une ligne de crédit aux données.

Réimpressions et autorisations

Yoon, KA, Lee, D., Lee, S. et al. Exploration du rôle potentiel des défensines dans la compétence vectorielle différentielle des poux de corps et de tête pour Bartonella quintana. Vecteurs parasites 16, 183 (2023). https://doi.org/10.1186/s13071-023-05802-4

Télécharger la citation

Reçu : 21 février 2023

Accepté : 08 mai 2023

Publié: 06 juin 2023

DOI : https://doi.org/10.1186/s13071-023-05802-4

Toute personne avec qui vous partagez le lien suivant pourra lire ce contenu :

Désolé, aucun lien partageable n'est actuellement disponible pour cet article.

Fourni par l'initiative de partage de contenu Springer Nature SharedIt